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PeproTech细胞因子溶解稀释方法

作者:联科生物    发布日期:2019-04-09 08:20


一、查看说明书

1. 确定合适的溶解液

收到产品后,首先应查看说明书中细胞因子储存和处理的方法。见下图:

2. 确定合适的温度

图中的表格给出了细胞因子在冻干粉(lyophilized)状态下的溶解(reconstituted)和稀释(extended storage)的储存温度以及时间,您可以根据自己的实际需要选择。


 

二、溶解

1. 离心

收到的管子内为冻干粉,开盖前要快速离心10000-12000rpm x 30s。
2. 溶解

根据说明书红色标识地方的描述,选择合适的溶解液,溶解到后边的浓度范围内。如此可以确保蛋白充分溶解复性,保证产品质量。请不要使用非建议溶液溶解。

目的:使细胞因子从无活性的冻干粉状态充分溶解复性成为有活性的蛋白溶液。

注意:不要用涡旋振荡仪剧烈涡旋,可以用枪头轻轻吹打几次助溶。有的细胞因子溶解比较慢,需要在室温静置或者摇床低速摇一段时间使充分溶解。

3.短期储存

溶解后的蛋白溶液可以在2-8度储存1周。
4.长期储存

如果您的实验,一周内不能用完。必须将第2步中获得的溶液用含载体蛋白的溶液进一步稀释。(详见:三、稀释)

目的:对溶解一步的蛋白溶液进行稀释冻存。加入载体蛋白可以封闭掉管壁上的蛋白结合位点,且可以在低温下维持细胞因子的稳定。
 

三、稀释

1. 配制

配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀释液备用(确保无菌),这三种稀释液的配制的Buffer可以用PBS或者细胞基础培养基。使用以上三种稀释液的任意一种稀释重悬的蛋白溶液,稀释浓度根据您的使用浓度确定,不要低于10ug/ml。即可分装成小管,冻存在-20--80度。
2.使用方法

使用时取用一支冻存的细胞因子,加入到您的培养基中至使用浓度。细胞因子应避免反复冻融。


 

四、你问我答

 
Q:为什么会有这么多种溶解方法?

A:蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明书上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。


Q:高于或低于该浓度范围会有什么问题呢?

A:首先,细胞因子或蛋白会不稳定,即很容易出现活性下降的现象。其次,高于这个浓度范围,可能会超过该蛋白的最大溶解浓度,即蛋白无法完全溶解。再者,高于或低于该浓度范围,蛋白可能会出现聚集(aggregation),最终结果还是部分蛋白未溶解,导致蛋白活性的减弱。


Q:若想保证溶解液与冻干粉充分混匀,以实现细胞因子或重组蛋白的完全溶解,该怎么办呢?
A:多数细胞因子或重组蛋白的冻干粉是非常容易溶解的,一般北京赛车pk28用移液枪的枪头轻吹几下,即可使细胞因子或重组蛋白完全溶解。

对于不易溶解的细胞因子或蛋白,PeproTech会在说明书中进行备注(Note)。如在重组人IL-13(产品编号:200-13)的说明书中您会看到:Slow to dissolve (缓慢溶解),在重组人IL-11(产品编号:200-11)的说明中会看到:This solution is slow to dissolve(该溶液溶解缓慢)。这种情况下,您最好能将要溶解的细胞因子或重组蛋白放在水平摇床(shaker)上低速摇一段时间,促使细胞因子或重组蛋白完全溶解。有些蛋白,如重组人IL-13 Variant (产品编号:200-13A)虽然难溶,但却不需用摇床来加速溶解。其说明书上的备注为:Allow the reconstituted vial to sit at 4度 for at > 2 hours before use. (将重悬液在4度静置2小时以上)。

 


五、注意事项

1. 一定要用推荐的溶液溶解冻干粉

2. 一定要溶解到指定的浓度。

3. 一定不能振荡(vortex)。

 

六、溶解稀释套装

联科生物细胞因子溶解稀释套装外观为无色澄清透明的液体,无明显异物,无菌,适用于细胞因子的溶解和稀释,使用方便,简单操作,可高效溶解并稳定保存相应的细胞因子。

类别   目录号   产品名称(简述)   规格
溶解稀释套装   PK002     重组细胞因子溶解稀释套装II   1 Kit
          溶
         
          解
    

          液
  PS0011   去离子水 ( Water )   1 ml
  PS0021   磷酸钠缓冲液 ( Sodium Phosphate )  5mM  pH 7.4   1 ml
  PS0031   柠檬酸盐缓冲液 ( Citric Acid )  10mM  pH 3.0   1 ml
  PS0041   醋酸盐缓冲液 ( Acetic Acid )  100mM   1 ml
  PS0051   Tris缓冲液 ( Tris )  5mM pH7.6   1 ml
  PS0061   1×PBS 缓冲液 ( Phosphate Buffer Solution PBS )   pH7.2   1 ml
  PS0071   磷酸钠缓冲液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 7.2   1 ml
  PS0081   磷酸钠缓冲液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 7.6   1 ml
  PS0091   磷酸钠缓冲液 ( Sodium Phosphate )  5 mM  pH 8.0   1 ml
  PS0101   5 mM HCl (pH 3.0)   1 ml
  PS0111     磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 10 mM pH 8.0   1 ml
  PS0121   磷酸钠缓冲液 (Sodium Phosphate) 10 mM pH 7.5   1 ml
稀释液   PD0021   PBS缓冲液 (含5%海藻糖) pH7.2 (PBS containing 5 % Trehalose )   10ml


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